Растителни и патогени материјали
Популација за мапирање на асоцијација со сорго, позната како популација на конверзија на сорго (SCP), беше обезбедена од д-р Пет Браун на Универзитетот во Илиноис (сега на UC Davis). Таа е опишана претходно и е збирка од разновидни линии конвертирани во фотопериодна неосетливост и помал раст за да се олесни растот и развојот на растенијата во американските средини. 510 линии од оваа популација беа користени во оваа студија, иако поради лошо ртење и други проблеми со контролата на квалитетот, не сите линии беа користени во анализата на сите три особини. На крајот, податоците од 345 линии беа користени за анализа на одговорот на хитин, 472 линии за одговорот на flg22 и 456 за отпорност на TLS.B. cookeiсојот LSLP18 е добиен од д-р Берт Блум на Универзитетот во Арканзас.
Мерење на MAMP одговорот
Во оваа студија беа користени два различни MAMP-а, flg22 (каталог на Genscript # RP19986) и хитин. Растенијата сорго беа одгледувани во влошки поставени на рамни површини исполнети со почва (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) во стаклена градина. Растенијата беа наводнувани еден ден пред собирањето примероци за да се избегне дополнителна влага во листовите на денот на собирањето.
Линиите беа рандомизирани и, од логистички причини, беа засадени во серии од 60 линии. За секоја линија, беа засадени три „саксии“ со две семиња по линија. Последователните серии беа засадени веднаш штом претходната серија беше обработена сè додека не се процени целата популација. Беа спроведени две експериментални проби за двата MAMP со генотипови повторно рандомизирани во секое од двете проби.
Тестовите за ROS беа извршени како што беше претходно опишано. Накратко, за секоја линија, шест семиња беа засадени во 3 различни саксии. Од добиените садници, три беа избрани врз основа на униформност. Садниците што изгледаа необично или беа значително повисоки или пократки од мнозинството не беа користени. Четири дискови од листови со дијаметар од 3 mm беа исечени од најширокиот дел од 4-тиот лист на три различни растенија сорго стари 15 дена. Еден диск по лист од две растенија и два диска од едно растение, при што вториот диск стана контрола на водата (видете подолу). Дисковите беа индивидуално лебдечки на 50 µl H2O во црна плоча со 96 бунари, запечатени со алуминиумска пломба за да се избегне изложување на светлина и чувани на собна температура преку ноќ. Следното утро беше направен реакционен раствор со употреба на хемилуминисцентна сонда L-012 од 2 mg/ml (Wako, каталог # 120-04891), 2 mg/ml пероксидаза од рен (тип VI-A, Sigma-Aldrich, каталог # P6782) и 100 mg/ml хитин или 2 μM Flg22. 50 µl од овој реакционен раствор беа додадени во три од четирите бунари. Четвртата бунар беше пробна контрола, на која беше додаден реакциониот раствор без MAMP. Во секоја плоча беа вклучени и четири празни бунари што содржеа само вода.
По додавањето на реакцискиот раствор, луминисценцијата беше измерена со помош на мултидетекциски читач на микроплочки SynergyTM 2 (BioTek) на секои 2 минути во текот на 1 час. Читачот на плочи врши мерења на луминисценцијата на секои 2 минути во текот на овој 1 час. Збирот од сите 31 отчитувања беше пресметан за да се добие вредноста за секоја бунарница. Проценетата вредност за одговорот на MAMP за секој генотип беше пресметана како (просечна вредност на луминисценција на трите експериментални бунари - вредност на пробната бунарница) - минус просечната вредност на слепата бунарница. Вредностите на слепата бунарница беа постојано блиску до нула.
Лисни дискови одНикотијана бентамијана, една линија од сорго со висок одзив (SC0003) и една линија од сорго со низок одзив (PI 6069) беа исто така вклучени како контроли во секоја плоча со 96 бунари за цели на контрола на квалитетот.
B. cookeiподготовка на инокулум и инокулација
B. cookeiИнокулумот беше подготвен како што беше претходно опишано. Накратко, зрната од сорго беа натопени во вода три дена, исплакнати, ставени во конусни колби од 1 литар и автоклавирани еден час на 15psi и 121 °C. Потоа зрната беа инокулирани со околу 5 ml мацерирана мицелија од свежа култура наB. cookeiизолати на LSLP18 и оставени 2 недели на собна температура, тресејќи ги колбите на секои 3 дена. По 2 недели, зрната сорго инфицирани со габи беа сушени на воздух, а потоа складирани на 4 °C до инокулација на терен. Истиот инокулум беше користен за целото испитување и се правеше свеж секоја година. За инокулација, 6-10 инфицирани зрна беа ставени во кружница од растенија сорго стари 4-5 недели. Спорите произведени од овие габи иницираа инфекција кај младите растенија сорго во рок од една недела.
Подготовка на семе
Пред садењето на полето, семето од сорго беше третирано со мешавина од фунгицид, инсектицид и заштитник што содржи ~ 1% фунгицид Spirato 480 FS, 4% фунгицид Sebring 480 FS, 3% заштитник за семе Sorpro 940 ES. Потоа семето беше сушено на воздух 3 дена, што обезбеди тенок слој од оваа мешавина околу семето. Заштитникот овозможи употреба на хербицидот Dual Magnum како третман пред појава.
Евалуација на отпорноста на дамки од целни листови
SCP беше засаден во Централната истражувачка станица за култури во Клејтон, Северна Каролина, на 14-15 јуни 2017 година и 20 јуни 2018 година во рандомизиран целосен блок дизајн со две експериментални повторувања во секој случај. Експериментите беа засадени во единечни редови од 1,8 m со ширина на ред од 0,9 m користејќи 10 семиња по парцела. Два гранични реда беа засадени околу периферијата на секој експеримент за да се спречат ефектите на рабовите. Експериментите беа инокулирани на 20 јули 2017 година и 20 јули 2018 година, кога растенијата сорго беа во фаза на раст 3. Оценките беа земени на скали од еден до девет, каде што растенијата што не покажуваа знаци на болест беа оценети со девет, а целосно мртвите растенија беа оценети со еден. Две оценки беа земени во 2017 година и четири отчитувања во 2018 година почнувајќи две недели по инокулацијата секоја година. sAUDPC (стандардизирана површина под кривата на прогресија на болеста) беше пресметана како што е опишано претходно.
Време на објавување: 01.04.2021