Растителни и патогени материјали
Популацијата за мапирање на асоцијација на сорго позната како популација на конверзија на сорго (SCP) беше обезбедена од д-р Пат Браун на Универзитетот во Илиноис (сега во УС Дејвис).Тој е опишан претходно и е збирка на различни линии претворени во фотопериодска нечувствителност и помал раст за да се олесни растот и развојот на растенијата во средини во САД.Во оваа студија беа искористени 510 линии од оваа популација, иако поради лошо ртење и други проблеми со контролата на квалитетот, не беа користени сите линии во анализата на сите три особини.На крајот, податоците од 345 линии беа користени за анализа на одговорот на хитин, 472 линии за одговорот flg22 и 456 за TLS отпор.B. cookeiсојот LSLP18 е добиен од д-р Бурт Блум од Универзитетот во Арканзас.
Мерење на одговор на MAMP
Два различни MAMP беа користени во оваа студија flg22, (Genscript каталог # RP19986) и хитин.Растенијата од сорго се одгледуваа во влошки поставени на станови исполнети со земја (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) во стаклена градина.Растенијата се наводнуваат еден ден пред собирањето на примерокот за да се избегне дополнителна влажност на листот на денот на собирањето.
Линиите беа рандомизирани и од логистички причини беа засадени во серии од 60 линии.За секоја линија беа засадени три „сакси“ со по две семиња по линија.Следните серии беа засадени веднаш штом претходната серија беше обработена додека не се процени целата популација.Беа спроведени две експериментални испитувања за двата MAMP со генотипови рерандомизирани во секое од двете испитувања.
ROS анализите беа спроведени како што беше претходно опишано.Накратко, за секоја линија беа засадени по шест семиња во 3 различни саксии.Од добиените садници, три беа избрани врз основа на униформност.Садници кои изгледаа необично или беа значително повисоки или пониски од мнозинството не беа користени.Четири листни дискови со дијаметар од 3 мм беа исечени од најширокиот дел од четвртиот лист од три различни растенија сорго стари 15 дена.Еден диск по лист од две растенија и два диска од едно растение, при што вториот диск станува контрола на водата (види подолу).Дисковите беа поединечно плутани на 50 µl H20 во црна плоча од 96 бунари, запечатени со алуминиумска заптивка за да се избегне изложување на светлина и се чуваа на собна температура преку ноќ.Следното утро беше направен раствор за реакција со користење на 2 mg/ml хемилуминисцентна сонда L-012 (Wako, каталог # 120-04891), 2 mg/ml рен пероксидаза (тип VI-A, Sigma-Aldrich, каталог # P6782) и 100 mg/ml хитин или 2 μM Flg22.50 µl од овој реакционен раствор се додадени во три од четирите бунари.Четвртиот бунар беше лажна контрола, на која беше додаден реакцискиот раствор со исклучок на MAMP.Во секоја чинија беа вклучени и четири празни бунари што содржат само вода.
По додавањето на реакциониот раствор, луминисценцијата се мери со помош на читач на микроплочи со повеќе откривање SynergyTM 2 (BioTek) на секои 2 минути за 1 час.Читачот на плочи зема мерења на луминисценција на секои 2 минути во текот на овој 1 час.Збирот на сите 31 читање беше пресметан за да се даде вредноста за секој бунар.Проценетата вредност за одговорот на MAMP за секој генотип беше пресметана како (просечна вредност на луминисценцијата на трите експериментални бунари - вредноста на лажниот бунар) - минус просечната вредност на празно бунар.Вредностите на празно бунар беа постојано блиску до нула.
Лисни дискови наНикотиана бентамиана, една линија на сорго со висока реакција (SC0003) и една линија на сорго со ниска реакција (PI 6069) исто така беа вклучени како контроли во секоја плоча со 96 бунари за целите на контрола на квалитетот.
B. cookeiподготовка на инокулум и инокулација
B. cookeiинокулумот беше подготвен како што е опишано претходно.Накратко, зрната од сорго се натопени во вода три дена, се исплакнуваат, се ставаат во конусни колби од 1L и се автоклавираат еден час на 15 psi и 121 °C.Зрната потоа беа инокулирани со околу 5 ml мацерирана мицелија од свежа култура наB. cookeiLSLP18 изолира и се остава 2 недели на собна температура, протресувајќи ги колбите на секои 3 дена.По 2 недели, зрната од сорго заразени со габа се сушат на воздух и потоа се чуваат на 4 °C до инокулација на полето.Истиот инокулум беше користен за целото испитување и се правеше свеж секоја година.За инокулација, 6-10 заразени зрна беа ставени во кривината на растенијата сорго стари 4-5 недели.Спорите произведени од овие габи иницираа инфекција кај младите растенија од сорго во рок од една недела.
Подготовка на семе
Пред садењето на полето, семето на сорго беше третирано со фунгицид, инсектицид и смеса за заштита која содржи ~ 1% фунгицид Spirato 480 FS, 4% Sebring 480 FS фунгицид, 3% Sorpro 940 ES заштитник за семиња.Потоа семето се сушеше на воздух 3 дена што обезбеди тенок слој од оваа мешавина околу семињата.Заштитувачот дозволи употреба на хербицидот Dual Magnum како третман пред појавата.
Евалуација на отпорноста на целната точка на листот
SCP беше засаден во Централната истражувачка станица за култури во Клејтон, NC на 14-15 јуни 2017 и 20 јуни 2018 година во рандомизиран комплетен блок дизајн со две експериментални репликации во секој случај.Експериментите беа засадени во единечни редови од 1,8 m со широчина од 0,9 m, користејќи 10 семиња по парцела.Два гранични редови беа засадени околу периферијата на секој експеримент за да се спречат ефектите на рабовите.Експериментите беа инокулирани на 20 јули 2017 година и на 20 јули 2018 година во кој момент растенијата сорго беа во фаза на раст 3. Оценките беа земени на скали од еден до девет, каде што растенијата кои не покажуваат знаци на болест беа оценети како девет и целосно мртвите растенија беа оценети како едно.Беа земени две оценки во 2017 година и четири отчитувања во 2018 година почнувајќи две недели по инокулацијата секоја година.sAUDPC (стандардизирана област под кривата на прогресија на болеста) беше пресметана како што е опишано претходно.
Време на објавување: април-01-2021 година